初次使用熒光筆的時候，應當將熒光筆進行數次搖動，這樣能夠使熒光筆中的墨水進行有效的活動和混合，然後對著比較堅硬的平面或者是桌子表面輕按筆尖，就像彈簧一樣來回進行擠壓，等到墨水從筆尖處滲出來之後，再進行書寫。在寫的時候，要勻速書寫，不要過快，以免墨水不能流暢的滲出，慢速書寫能夠使書寫時墨水的效果更加勻稱。如果字跡已經幹了，就不要再用筆去進行塗寫了，以免造成筆頭被堵塞，出水不暢的情況發生。使用完畢之後，應當立刻擰緊熒光筆的筆帽，以免影響熒光筆的使用效果。天氣炎熱的時候，不要在風扇的下面書寫，很容易造成熒光筆的筆頭髮幹，書寫不流暢，更不能在過於乾燥的情況下不蓋上筆帽，這會嚴重影響熒光筆的使用壽命和使用效果。
