新三板和老三板的區別主要在於：
1、概念不同：
新三板是一個專門為中小微型企業設定的證券交易市場；而老三板則指的是從主機板市場終止上市後退下來的“退市股”，以及從原來兩個法人股市場退下來的“兩網股”。
股票如果常年虧損，或者公司出現有欺詐、信披違法等情況的話，就會從主機板市場退出，而之後就會進入老三板，在老三板掛牌轉讓。而新三板一開始只針對中關村科技園區非上市股份有限公司，後來就沒有侷限了，在新三板的股票，可以進行定向增發股份，流通增值。
2、交易規則不同：
新三板遵循的是主機板的交易規則，一般是每週一到每週五的上午9點半到11點半，以及下午的13點到15點進行交易（法定節假日除外），漲跌幅限制10%。而老三板的話，流動性很差，一週通常只能交易一到五次左右，漲跌幅限制5%。
