在觀察標本切片時，必然要進行調焦。通常先進行粗調，然後進行微調。在粗調時應根據不同倍率物鏡的工作距離作粗略調焦，接著用眼觀察目鏡作粗調，直至能看到標本的輪廓後再進行微調，使物像達到最清晰為止。有時粗動手輪由於長期使用而感到過鬆時，則可用手緊握一隻細動手輪，而另一隻手轉動另一隻粗動手輪，以作適 當的調節即可。有時在粗微調的某一段有鬆緊不合適時，則可適當地變換粗微調的位置。在使用高倍物鏡時，一般來說，由於高倍物鏡留的工作距離比較短，應在調焦時應由上至下，這樣可避免由於調焦不小心使物境碰撞切片，損壞鏡頭。
