顯微鏡鏡筒的兩端各有一組透鏡，每組透鏡的作用都相當於一個凸透鏡，靠近眼睛的凸透鏡叫做目鏡，靠近被觀察物體的凸透鏡叫做物鏡。來自被觀察物體的光經過物鏡後成一個放大的實像，目鏡的作用像一個普通的放大鏡，將像再放大一次。經過兩次放大作用，就可看到肉眼看不見的小物體。對於物鏡來說，應使物距放在物鏡的一倍焦距與兩倍焦距之間，為看清物體，物距不能太大。同時，物鏡的焦點與目鏡的焦點是重合的，經物鏡所成的倒立放大的實像必位於物鏡的兩倍焦距以外，而為了讓該像落在目鏡的焦距以內，所以目鏡的焦距就必須大於物鏡的焦距，這也是顯微鏡目鏡的焦距應該大於物鏡的焦距的原因。
