貓頭鷹晚上不睡覺。貓頭鷹絕大多數是夜行性動物，晝伏夜出，白天睡覺，隱匿於樹叢巖穴或屋簷中不易見到，晚上活動。但也有部分種類如斑頭鵂鶹、縱紋腹小鴞和雕鴞等白天亦不安寂寞，常外出活動。一貫夜行的種類，一旦在白天活動，常飛行顛簸不定猶如醉酒。貓頭鷹睡覺時，總是睜一眼，閉一眼。
貓頭鷹是典型的夜行性鳥類。它的視覺神經非常敏感，白天的紫外線會對它的眼睛造成傷害。並且貓頭鷹的生理結構已經發展成適合晚上捕獵的了。貓頭鷹的眼球呈管狀，有人把貓頭鷹的眼睛形容成一架微形的望遠鏡。在貓頭鷹眼睛的視網膜上有極其豐富的柱狀細胞。由於貓頭鷹是夜晚出來覓食的猛禽，所以它的眼睛具有很多特殊的構造。視網膜上的感光細胞有兩種，一種是錐狀細胞，另一種是柱狀細胞。錐狀細胞可以感受強光，柱狀細胞可以感受弱光。白天活動的鳥類，視網膜上的感光細胞主要是由錐狀細胞所組成，所以白天視力很強，夜晚則較差。
