貓頭鷹的食物以鼠類為主， 也吃昆蟲、小鳥、 蜥蜴、魚等動物。
它們都有吐“ 食丸”的習性，其素囔具有消化能力，食物常常整吞下去，並將食物中不能消化的骨骼、 羽毛、毛髮、 幾丁質等殘物渣滓整合塊狀，形成小團經過食道和口腔吐出，叫食丸也叫唾餘；科學家可以根據對食丸的分析，瞭解它們的食性。
貓頭鷹一旦判斷出獵物的方位，便迅速出擊。貓頭鷹的羽毛非常柔軟，翅膀羽毛上有天鵝絨般密生的羽絨，因而貓頭鷹飛行時產生的聲波頻率小於1千赫，而一般哺乳動物耳朵是感覺不到那麼低的頻率的。這樣無聲的出擊使貓頭鷹的進攻更有“閃電戰”的效果。據研究，貓頭鷹在撲擊獵物時，它的聽覺仍起定位作用。它能根據獵物移動時產生的響動，不斷調整撲擊方向，最後出爪，一舉奏效。
