酒精脫色為整個流程最關鍵的一步。
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟。
革蘭氏染色法，是指細菌學中廣泛使用的一種重要的鑑別染色法，屬於復染法。這種染色法是由丹麥醫生革蘭於1884年所發明，最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷伯肺炎菌。革蘭染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟。未經染色的細菌，由於其與周圍環境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難區別。經染色後，陽性菌呈紫色，陰性菌呈紅色，可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵，從而用以分類鑑定。染色原理：通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細菌細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，再用95%乙醇脫色。
