1、免疫動物
免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的過程;
2、細胞融合
採用眼球摘除放血法處死小鼠,無菌操作取出脾臟,在平皿內擠壓研磨,製備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合,並加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合,形成雜交瘤細胞;
3、選擇性培養
選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞,一般採用HAT選擇性培養基;
4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化
採用靈敏、快速、特異的免疫學方法,篩選出能產生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞,並進行克隆擴增;
5、單克隆抗體的大量製備
單克隆抗體的大量製備一般採用動物體內誘生法和體外培養法。