根據情況決定。如果用酵母粉進行發酵，在第一次發酵比較成功的情況下，發酵體積達到原先發糕糊的兩倍大時，可無需進行二次發酵，若第一次發酵並不大好，可通過二次發酵進行補救，有利於發糕成品的蓬鬆。如果是用泡打粉作為發糕的快速膨鬆劑材料，便無需進行發酵這個程式，只需調拌好麵糊以後，就能直接上鍋蒸。
發糕二次發酵要多久：一般15-20分鐘即可。 紅糖發糕採用酵母粉製作的話，需要進行兩次發酵，第一次溫度適宜的話，大約發酵40分鐘-1小時即可，等完成第一次發酵工序後，再用筷子攪拌，排出其內部多餘的氣體，再放在溫度適宜的密封環境下進行第二次發酵，這次發酵的時間比較短，只需15-20分鐘即可。
